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液相色譜柱清洗方法
gao效液相色譜是20世紀(jì)60年代后期發(fā)展起來的分離分析技術(shù),手性色譜柱多少錢,是現(xiàn)代分離測定的重要手段。問世以來,因其具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度好、能分析高沸點(diǎn)但不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、及---分析。gao效液相色譜柱是消耗品,會(huì)隨使用時(shí)間或進(jìn)樣的次數(shù)增加,手性色譜柱價(jià)格,出現(xiàn)色譜峰高降低,峰寬加大或出現(xiàn)肩峰,柱效下降。需要定期進(jìn)行---清洗和再生,不同的色譜柱清洗方法各不相同比如:
1、反相色譜柱
分別用jia醇:水=90:10,純jia醇hplc級,異bing醇hplc級,---jia烷hplc級等溶劑作為流動(dòng)相,依次沖洗,每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的色譜柱體積.然后再以相反的次序沖洗。
2、正相色譜柱
分別用正---hplc級,異bing醇hplc級,---jia烷hplc級,jia醇hplc級等溶劑做流動(dòng)相,順次沖洗,每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的柱體積(異bing醇粘度大,可降低流速,避免壓力過高).注意使用溶劑的次序不要顛倒,用jia醇沖洗完后,再以相反的次序沖洗至正---,所有的流動(dòng)相必須嚴(yán)格脫水。
3、離子交換色譜柱
長時(shí)間在緩沖溶液中使用和進(jìn)樣,將導(dǎo)致色譜柱離子交換能力下降,用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽離子柱再生,反之,用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。
另外,還可以選擇能溶解柱內(nèi)污染物的溶劑為流動(dòng)相做正方向和反方向沖洗。但再生后的色譜柱柱效是不可能恢復(fù)到新柱的水平的.如果柱子裝反了,可以調(diào)回來,手性色譜柱廠家,但可能會(huì)造成柱內(nèi)擔(dān)體塌陷.在不得已的情況下盡量不要反裝色譜柱。
完整的手性分離方案
從分析到制備級別,簡化手性分離,均是明智的投入!
lux手性柱和填料通過以下三種方法簡化分離過程:
?---和傳統(tǒng)的固定相相結(jié)合,增加手性篩選的成功率
?完全兼容于正相體系、極性有機(jī)相體系、超臨界流體
?色譜及反相體系的方法-無需換柱!
使用lux?篩選工具包
可以分離92%*的對映體
現(xiàn)有5種---的固定相可選擇!
1.amylose-2:---的---固定相擴(kuò)大了對映體選擇性范圍;
2.cellulose-2:新型---固定相提高您手性篩選的成功率;
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a:物理因素1.硅膠純度 ----· 填料硅膠的純度與殘留金屬離子濃度
2.色譜柱尺寸---填料床的長度和內(nèi)徑
3.顆粒形狀------球型或不規(guī)則型
4. 粒徑------------平均顆粒直徑, 通常3-10µm
5.表面積---------顆粒外表面和內(nèi)部孔表面的總和, 以m2/gram表示
6.孔徑------------顆粒的孔或腔的平均尺寸, 范圍80-300å
b:化學(xué)性質(zhì)
1.鍵合類型----- 單體鍵合 - 鍵合相分子與基體單點(diǎn)相連
2.碳覆蓋率------與基體物質(zhì)相連的鍵合相的量
3.封端------------鍵合步驟之后, 用---將luo露的硅---鍵合后封閉起來
手性色譜柱的介紹
液相色譜柱是基于配體交換類型的手性色譜柱,-適合于---酸,---酸和---醇類手性化合物的手性拆分。
手性色譜系列獨(dú)具特色,其產(chǎn)品包括新型配體交換型、多糖衍生物型、環(huán)糊精類型手性柱。另外,可根據(jù)客戶需求,加工制作各種規(guī)格包括制備型手性柱。
多糖類手性柱,涂覆型三(3,5-二甲ben基------酯纖維素手性色譜柱 (cod柱),揭陽手性色譜柱,適用于sheng物堿、β-受體拮抗劑、胺等化合物的拆分。涂覆型三3,5-二甲ben基------酯淀粉手性色譜柱(cad柱) ,適用于sheng物堿、胺、β-受體拮抗劑等化合物的拆分。涂覆型三ben---酯纖維素手性色譜柱(cob柱),適用于脂肪族和芳香族小分子化合物的拆分。
新型配體交換手性柱分為涂敷型和鍵合型兩類,非常適合于對各類---酸、---酸及---醇類化合物的手性拆分,具有分離度高,柱效穩(wěn)定等特點(diǎn)
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預(yù)柱或保護(hù)柱用還是不用的問題!原來分析中---種時(shí),我一直都是用保護(hù)柱。但來到新公司后,發(fā)現(xiàn)大家都沒有使用,幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室連保護(hù)柱都沒找到一個(gè),也就是說大家-都沒有用過。后來問一個(gè)老員工,說是有可能影響---分析。想問:安裝保護(hù)柱后會(huì)影響樣品分析嗎?我們做的大多是tou孢類的kang生素。
答:應(yīng)該這樣說,加上保護(hù)柱,肯定有利于保護(hù)色譜柱不受一些顆粒物質(zhì)的堵塞,肯定有害于分離度和柱效,因?yàn)楸Wo(hù)柱中間有著死體積的存在。但是如果保護(hù)柱接得好,并且盡量控制其匹配性和經(jīng)常更換,分離度和柱效應(yīng)該影響并不大。tou孢類的kang生素也要看到底是yuan料藥還是制劑嘍,有些yuan料藥,可以根據(jù)色譜柱的損耗選擇添加預(yù)柱(中間是個(gè)篩板),制劑的話,如果有輔料---干擾或者流動(dòng)相鹽分比較大,那還是z好配個(gè)保護(hù)柱。
用的是四元梯度泵a50%jia醇水經(jīng)常出現(xiàn);蜻M(jìn)氣泡這是什么原因?
答:水/jia醇比例在55:45時(shí),黏度和柱壓有個(gè)-值。50:50接近了這個(gè)極值,柱壓是比較高的,但影響柱壓z大的還是填料粒徑和色譜柱內(nèi)徑,---實(shí)例中不知用的什么規(guī)格的色譜柱?系統(tǒng)壓力高,可能會(huì)因溶劑泵中的過濾頭供液速度跟不上而導(dǎo)致氣泡進(jìn)入系統(tǒng),停機(jī)也應(yīng)該是因?yàn)闅馀葸M(jìn)入壓力下降的原因,可考慮更換液體通量的過濾頭。
資料顯示:在正常條件下,填料粒度>20μm時(shí),干法填充制備柱較為合適;顆粒<20μm時(shí),濕法填充較為理想。填充方法一般有4種
高壓勻漿法,多用于分析柱和小規(guī)模制備柱的填充;
徑向加壓法,waters-;
軸向加壓法,主要用于裝填大直徑柱;
干法。柱填充的技術(shù)性很強(qiáng),大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用已填充好的商品柱。為什么以20um為分界點(diǎn)?填料方法的---種都是濕法嗎,能不能對四種填充方法做一個(gè)簡短的說明?
對尿液中的jia基ben-和ben-對映體進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的手性分離lux 3μm amp 是一款專為ben-和取代ben-包括jia基ben-的手性分析而開發(fā)和測試的---液相色譜填料。一旦確定樣品中存在ben-或jia基ben-,便可輕松實(shí)現(xiàn)對映體確認(rèn)。不受常見干擾物的影響
lux 3μm amp 的另一個(gè)-優(yōu)勢是,在分離ben-和jia基ben-對映體時(shí)不會(huì)受到下列常見的zhi療和成分的影響。此外,luxamp 色譜柱的分離能力也有助于分離取代ben-的對映體
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